基因工程实验指南

第一章 仪器设备 001

分子生物学实验室常用仪器设备简介 001

第二章 核 酸 009

第一节 核酸的构成 009

第二节 基因组 DNA 的提取 014

第三节 TENS 法提取微生物基因组 DNA 018

第四节 DNA 的扩增 019

第五节 DNA 片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化 021

第六节 DNA 重组及鉴定 028

第七节 核酸分子杂交技术 031

第八节 Southern blotting 技术 041

第九节 植物总 RNA 的提取和检测 048

第十节 poly（A） RNA 的提取 051

第十一节 无菌感染期线虫 RNA 的提取 051

第十二节 果蝇总 RNA 的提取 053

第十三节 哺乳动物 RNA 的提取 054

第十四节 反转录 RNA 055

第十五节 半定量 PCR 技术 056

第十六节 实时荧光定量 PCR 技术 057

第十七节 Northern bloting 技术 059

第十八节 核酸染色 061

第十九节 双脱氧链终止法测序技术 064

第二十节 焦磷酸测序（Pyrosequencing） 066

第二十一节 核酸信息分析 068

基因工程 实验指南

第三章 蛋 白 质 080

第一节 定量蛋白质组学 084

第二节 植物蛋白的提取 085

第三节 动物蛋白质的提取 088

第四节 动物细胞器蛋白的提取 089

第五节 细菌蛋白质的提取 093

第六节 原核表达 094

第七节 用 IPTG 诱导大肠杆菌表达重组绿色荧光蛋白 098

第八节 蛋白质的定量 099

第九节 聚丙烯酰胺变性凝胶电泳 104

第十节 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 108

第十一节 双向凝胶电泳 110

第十二节 Western bolting 技术 114

第十三节 蛋白质转印实验 半干式 116

第十四节 蛋白质转印实验 电泳液式 118

第十五节 蛋白质染色 119

第十六节 染色质免疫沉淀技术（ChIP） 121

第十七节 凝胶迁移实验（EMSA） 125

第十八节 超迁移 EMSA（Super-Shift EMSA） 129

第十九节 蛋白质序列分析 131

第四章 载体构建及扩繁 132

第一节 DNA 限制性内切酶酶切分析 132

第二节 PCR 产物连接 135

第三节 连接产物的转化 136

第四节 挑菌与摇菌 140

第五节 保菌 141

第六节 菌液 PCR 检测 141

第七节 质粒提取 142

第八节 质粒 DNA 的电泳检测 145

第九节 ABI3730XL 测序实验程序 146

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　目 录

第十节 感受态细胞的制备 151

第十一节 农杆菌转化法 152

第十二节 基于毛细管电泳的荧光检测 SSR 实验程序 153

第五章 蛋白质—蛋白质相互作用 156

第一节 目标蛋白的亚细胞定位 156

第二节 酵母双杂交 160

第三节 酵母文库的筛选 164

第四节 免疫共沉淀 165

第五节 GST 融合蛋白进行 Pulldow 实验 168

第六节 双分子荧光互补（BiFC） 169

第七节 荧光共振能量转移

［Fluorescence resonance energy transfer（FRET）］… 175 第八节 Far Western blotting 印迹法 176

第九节 酵母单杂交实验 179

第十节 原生质体提取及转化步骤 180

第六章 作物转化 183

第一节 浸蘸法转化拟南芥 185

第二节 农杆菌侵染法转化烟草 187

第三节 烟草瞬时表达 190

第四节 农杆菌侵染法水稻 191

第五节 生理指标的测定 193

第七章 常用试剂的配制 197

第一节 抗生素溶液的配制 197

第二节 常用缓冲液的配制 198

第三节 常用培养基的配制 207

参考文献 211