植物基因工程技术

目录
序言
译序
Ⅰ 植物基因处理方法
第一章 DNA的抽提方法
1.1 核DNA
1.1.1 花椰菜总DNA的抽提
1.1.2 从菠菜叶片抽提核DNA
1.2 叶绿体DNA
1.2.1 叶绿体的分离
1.2.2 叶绿体DNA的抽提
1.3 线粒体DNA——甜菜线粒体DNA的抽提
1.4 病毒DNA的抽提方法
1.4.1 从精制病毒粒子中抽提DNA
1.4.2 从感染叶片直接抽提病毒DNA的方法
第二章 基因的检测
2.1 限制酶
2.2 凝胶电泳
2.3 Southern转移杂交
2.3.1 Southern转移
2.3.2 用RNA作探针的杂交
2.3.3 用DNA作探针的杂交
第三章 使用cDNA进行克隆
3.1 mRNA的制备
3.1.1 用SDS——酚法抽提总RNA
3.1.2 poly（A）+RNA的分离
3.2 无细胞蛋白质合成
3.2.1 麦胚抽提液的制备
3.2.2 翻译反应
3.3 用质粒载体建立cDNA库
3.3.1 单链cDNA的合成与模板mRNA的碱水解
3.3.2 在单链cDNA的3′OH末端加上dC的同聚物
3.3.3 双链cDNA的制成
3.3.4 对双链cDNA末端加工以插入质粒
3.3.5 与pstI切口3′末端加有oligodG的pBR322退火
3.3.6 转化
3.3.7 cDNA克隆的筛选
第四章 用Charon30进行克隆——基因组DNA的基因库
4.1 包装抽提液的制备
4.2 Charon30载体DNA及基因组DNA片段的制备
4.3 包装与基因库的扩增
第五章 特定基因的克隆
5.1 rRNA基因
5.1.1 制备含有蚕豆rDNA的Eco RI片段的DNA组分
5.1.2 pBR325的Eco RI酶解与碱性磷酸酯酶处理
5.1.3 蚕豆核DNA的Eco RI片段与载体的结合
5.1.4 大肠杆菌的转化
5.1.5 用菌落杂产法选择带有rDNA片段的重组子
5.2 tRNA基因
5.2.1 tRNA基因的克隆
5.2.2 tRNA基因的确定
5.3 重复性DNA
5.3.1 蚕豆核DNA用Bam HI处理形成片段后，通过琼脂糖凝胶电泳分离重复序列并从胶中进行回收
5.3.2 蚕豆核DNA的Bam HI重复序列与pBR322的结合，以及大肠杆菌HB101的转化
5.3.3 重组质粒中含有重复序列的验证
5.3.4 用2种限制酶浓缩重复DNA序列（蚕豆Fok I重复序列的例子）
5.4 叶绿体蛋白质
5.4.1 转录起点和终点的决定：S1作图法
5.4.2 转录产物的检测：Northern杂交
5.5 植物ars
5.5.1 酵母的转化
5.5.2 从酵母转化子中抽提总DNA
5.6 大豆球蛋白A3B4中间亚基cDNA的克隆
第六章 RNA病毒及类病毒的克隆
6.1 TMV（普通株）的制备
6.2 TMV——RNA的制备
6.3 HSV的纯化
6.4 TMV——RNA上添加poly（A）
6.5 HSV上添加poly（A）
6.6 用冈山——Berg法克隆HSV cDNA
6.6.1 用载体引物合成cDNA
6.6.2 加上oligo dC链
6.6.3 用Hind Ⅲ切断
6.6.4 用DNA连接物环化
6.6.5 用缺口转移将RNA链换成DNA链
6.6.6 转化
6.7 TMV cDNA的克隆
6.7.1 TMV cDNA的合成
6.7.2 用碱性蔗糖密度梯度离心分级cDNA
6.7.3 cDNA上添加oligo dC
6.7.4 用载体引物合成双链DNA
6.7.5 用连接酶将DNA环化和转化
第七章 Ti质粒的检测及制备
7.1 Ti质粒的检测方法
7.2 Ti质粒的制备方法
第八章 DNA碱基顺序测定法
8.1 酶法
8.1.1 待测DNA的克隆
8.1.2 单链DNA的制备
8.1.3 聚合酶反应
8.2 化学法（Maxam-Gilbert）
8.2.1 DNA5'端标记
8.2.2 标记DNA片段用丙烯酰胺凝胶电泳进行分离
8.2.3 碱基专一性反应
8.2.4 应用凝胶电泳确定碱基顺序
第九章 RNA碱基顺序测定法
第十章 应用DABITC方法测定蛋白质的一级结构
Ⅱ 细胞融合
第十一章 融合方法及杂种的形成
11.1 PEG-Ca法
11.2 葡聚糖法
11.3 烟草属杂种的育成
第十二章 形成变异的方法
12.1 铝抗性植株的育种
12.2 营养缺陷型变异株的形成
12.2.1 用诱变剂处理原生质体
12.2.2 营养缺陷型植株的鉴定
第十三章 杂种的鉴定方法
13.1 组分I蛋白
13.1.1 烟草组分I蛋白的结晶及其抗体的制备
13.1.2 组分I蛋白样品的制备
13.1.3 等电聚焦电泳
13.1.4 组分I蛋白的Western转移法
13.2 核糖体RNA基因（rDNA）
13.3 染色体原位杂交法
本书所用缩写或简称
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