现代生化技术

第三版前言
第二版前言
第一版前言
第一篇生化分离技术
第一章提取与沉淀分离技术
第一节细胞破碎
一、机械破碎法
二、物理破碎法
三、化学破碎法
四、酶促破碎法
第二节提取
一、提取的方法
二、影响提取的因素
第三节沉淀分离
一、盐析沉淀法
二、等电点沉淀法
三、有机溶剂沉淀法
四、复合沉淀法
五、金属盐沉淀法
六、选择性变性沉淀法
第四节实验
实验1—1大肠杆菌细胞的超声波破碎
实验1—2枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析
实验1—3枯草杆菌DNA的提取与分离
实验1—4酵母RNA的提取与分离
实验1—5大蒜细胞SOD的提取与分离
实验1—6大鼠肝rRNA的提取与分离
第二章过滤与膜分离技术
第一节非膜过滤
一、非膜过滤的分类
二、非膜过滤的操作过程
第二节膜分离技术
一、膜分离的分类
二、膜分离的操作过程及其控制
第三节实验
实验2—1胰凝乳蛋白酶的透析脱盐
实验2—2糖化酶的超滤分离
第三章萃取分离技术
第一节有机溶剂萃取
一、有机溶剂的选择
二、有机溶剂萃取的操作过程
第二节双水相萃取
一、双水相萃取的原理
二、双水相萃取的操作过程
第三节超临界萃取
一、超临界萃取的原理
二、超临界萃取的操作过程
第四节反胶束萃取
一、反胶束萃取的原理
二、反胶束萃取的操作过程
第五节实验
实验3—1青蒿素的超临界萃取分离
实验3—2人生长激素的双水相萃取分离
实验3—3穿心莲内酯的有机溶剂萃取
第四章层析分离技术
第一节吸附层析
一、吸附层析原理
二、吸附柱层析
三、聚酰胺薄膜层析
四、其他吸附层析
第二节分配层析
一、纸层析
二、薄层层析
三、气相层析
第三节离子交换层析
一、离子交换剂的选择与处理
二、离子交换层析的操作过程
第四节凝胶层析
一、凝胶层析的基本原理
二、凝胶的选择与处理
三、凝胶层析操作过程
第五节亲和层析
一、亲和层析母体和配基
二、亲和层析方法
第六节层析聚焦
一、交换剂和缓冲液体系
二、pH梯度的形成
三、层析聚焦的操作过程
第七节实验
实验4—1蛋白质溶液的凝胶层析脱盐
实验4—2氨基酸的纸层析
实验4—3核苷酸的离子交换层析
实验4—4胰蛋白酶的亲和层析
实验4—5凝胶层析测定蛋白质的相对分子质量
实验4—6DNS—氨基酸的聚酰胺薄膜层析
实验4—7醇酯成分的气相层析
实验4—8胆酸混合液的薄层层析
第五章电泳技术
第一节电泳的基本原理
第二节纸电泳
一、缓冲液的选择
二、滤纸的选择与剪裁
三、电泳操作要点
第三节薄层电泳
第四节薄膜电泳
第五节凝胶电泳
一、聚丙烯酰胺凝胶的制备原理
二、不连续电泳中样品压缩成层的原理
三、SDS—凝胶电泳原理
四、凝胶电泳的操作要点
第六节等电点聚焦电泳
一、稳定pH梯度的形成
二、两性电解质载体
三、支持pH梯度的介质
四、等电点聚焦电泳的操作要点
第七节实验
实验5—1核苷酸的纸电泳
实验5—2蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳
实验5—3DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验5—4蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验5—5SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量
实验5—6蛋白质的二元凝胶电泳
第六章离心分离技术
第一节离心机的选择
一、常速离心机
二、高速离心机
三、超速离心机
第二节离心方法的选择
一、差速离心
二、密度梯度离心
三、等密度梯度离心
第三节离心条件的确定
一、离心力
二、离心时间
三、温度
四、pH
第四节实验
实验6—1细菌核糖体的分离
实验6—2大肠杆菌细胞膜的分离
实验6—3RNA的蔗糖密度梯度离心分离
实验6—4大鼠肝细胞核的分离
第二篇生化检测技术
第七章化学检测技术
第一节糖类的化学检测
一、蓝一爱农法
二、斐林试剂快速法
三、次碘酸钠法
四、铜试剂法
第二节蛋白质和氨基酸的化学检测
一、定氮法测定蛋白质的含量
二、双缩脲试剂法测定蛋白质含量
三、福林一酚试剂法测定蛋白质含量
四、蛋白质N端氨基酸丹磺酰化测定法
五、蛋白质的氨基酸排列顺序测定——埃德曼分析法
六、蛋白质N端氨基酸2，4—二硝基氟苯测定法
七、茚三酮显色法测定氨基酸含量
八、甲醛滴定法测定氨基酸
第三节蛋白质的免疫化学检测
一、基本概念与原理
二、蛋白质的免疫化学检测方法
第四节核酸的化学检测
一、定磷法测定核酸含量
一、二苯胺法测定DNA含量
三、地衣酚法测定RNA含量
第五节实验
实验7—1斐林试剂置换法测定还原糖
实验7—2葡萄糖淀粉酶的活力测定
实验7—3微量凯氏定氮法测定总氮量
实验7—4福林—酚试剂法测定蛋白质含量
实验7—5丹磺酰化法分析蛋白质N端氨基酸
实验7—6异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序
实验7—7茚三酮显色法测定氨基酸含量
实验7—8双向免疫扩散法测定抗血清效价
实验7—9定磷法测定核酸含量
实验7—10地衣酚显色法测定核糖核酸（RNA）含量
实验7—11二苯胺显色法测定DNA含量
第八章光学检测技术
第一节旋光检测技术
一、原理
二、操作要点
第二节荧光检测技术
一、邻苯二甲醛荧光分析法测定氨基酸
二、荧光胺荧光分析法测定肽含量
第三节分光光度检测技术
一、原理
二、操作要点
第四节实验
实验8—1旋光法测定味精的纯度
实验8—2荧光法测定核黄素含量
实验8—3荧光法测定氨基酸含量
实验8—4紫外线吸收法测定核酸含量
实验8—5紫外线吸收法测定蛋白质含量
第九章酶学检测技术
第一节酶学检测技术的特点
一、酶学检测的专一性强
二、酶学检测的灵敏度高
三、酶学检测的速度快
四、酶学检测的条件温和
第二节酶法分析技术
一、酶法分析的基本过程
二、常用于酶法分析的酶及其检测方法
第三节酶联免疫吸附检测技术
一、ELISA的基本原理
二、ELISA常用的标记酶
三、常用的ELISA方法
四、ELISA技术的应用
第四节实验
实验9—1利用酶法分析测定鸡蛋中总胆固醇的含量
实验9—2利用酶法分析快速测定发酵液中的L—乳酸
实验9—3利用酶法分析测定发酵液中葡萄糖的浓度
实验9—4酶联免疫吸附检测法（双抗体夹心法）检测艰难梭菌毒素
实验9—5酶联免疫吸附检测法（间接法）测定兔血清免疫球蛋白IgG
第十章气体检测技术
第一节华勃氏呼吸仪检压法
第二节范·斯莱克检测仪测定α—氨基酸含量
第三节实验
实验10—1酵母细胞耗氧量的测定
实验10—2华勃氏呼吸仪测定L—谷氨酸脱羧酶活力
实验10—3华勃氏呼吸仪测定L—谷氨酸含量
第十一章生物检测技术
第一节安全性试验
一、毒性试验
二、局部刺激性试验
三、溶血试验
四、热原试验
五、过敏试验
第二节生长抑制物质的生物效价测定
一、稀释法
二、扩散法
第三节生长促进物质的生物效价检测
一、稀释法
二、扩散法
三、比浊法
四、漓定法
第四节实验
实验11—1卡那霉素的效价测定
实验11—2二环素的杀菌能力测定
实验11—3细胞病变抑制法测定干扰素的效价
实验11—4热原试验
第十二章放射性同位素检测技术
第一节基本知识
一、放射性同位素
二、放射性同位素的衰变与射线
三、衰变规律
四、放射线的防护
第二节放射性同位素的检测
一、放射自显影技术
二、盖革计数管探测
三、闪烁计数器探测
第三节放射性同位素的掺人
第四节实验
实验12—1γ—32P—ATP的酶促合成
实验12—23H—蛋白质的生物合成
实验12—33H—蛋白质凝胶的放射荧光显影
第三篇酶、基因和细胞操作技术
第十三章酶操作技术
第一节酶生物合成的调节技术
一、酶的诱导合成
二、酶生物合成的阻遏
第二节酶反应动力学的研究技术
一、酶反应初速率的测定
二、底物浓度对反应速率的影响——Km和Umax的测定
三、最适温度、热稳定性和活化能的测定
四、最适pH的测定
五、酶的激活与抑制
第三节酶、细胞和原生质体固定化技术
一、吸附法固定化技术
二、包埋法固定化技术
三、结合法固定化技术
四、交联固定化技术
第四节酶分子修饰技术
一、金属离子置换修饰
二、大分子结合修饰
三、酶的侧链基团修饰
四、肽链有限水解修饰
五、核苷酸链的剪切修饰
六、氨基酸置换修饰
七、核苷酸置换修饰
八、酶分子的物理修饰
第五节酶分子定向进化技术
一、基因体外随机突变技术
二、突变基因的高通量筛选技术
第六节实验
实验13—1β—半乳糖苷酶的诱导合成
实验13—2无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用
实验13—3碱性磷酸酶的反应动力学性质
实验13—4L—谷氨酸脱羧酶的固定化
实验13—5枯草杆菌细胞固定化
实验13—6谷氨酸棒杆菌原生质体固定化
实验13—7固定化原生质体生产谷氨酸脱氢酶
实验13—8采用易错PCR技术提高扁桃酸酯酶的立体选择性
实验13—9利用DNA重排技术提高β甘露聚糖酶的温度耐受性
第十四章基因操作技术
第一节基因的获取技术
一、分离法
二、反转录法
三、化学合成法
四、聚合酶链反应技术
第二节载体的制备技术
一、载体的分类
二、载体的制备
第三节DNA体外重组技术
一、黏性末端连接
二、平头末端连接
三、修饰末端连接
第四节重组DNA引入受体细胞技术
一、受体细胞的筛选与处理
二、外源DNA引入受体细胞
第五节重组DNA的鉴定技术
一、DNA印迹技术
二、RNA印迹技术
三、蛋白质印迹技术
四、DNA序列测定技术
第六节实验
实验14—1大肠杆菌ColEI质粒的分离
实验14—2重组DNA的细胞转化
实验14—3Sanger测序法测定基因的序列
实验14—4DNA印迹杂交
实验14—5PCR扩增目的基因
实验14—6碱裂解法提取质粒DNA
第十五章细胞操作技术
第一节动物细胞融合技术
一、细胞的制备
二、细胞融合
三、融合子的筛选
第二节原生质体融合技术
一、原生质体制备
二、原生质体融合
三、细胞壁的再生
四、融合子的筛选
第三节细胞拆合技术
一、细胞器的分离
二、细胞器重组
第四节实验
实验15—1枯草杆菌原生质体的制备
实验15—2酵母原生质体的分离与再生
实验15—3从胡萝卜细胞分离原生质体
实验15—4动物细胞微核体和胞质体的制备
主要参考文献
附录