细胞因子研究方法学

目录
第三节 细胞因子的研究方法
二、 趋化试验
三、 用显色反应计数趋化的中性粒细胞
四、 IL-16诱导T淋巴细胞趋化实验
第四节 用β葡萄糖醛酸或过氧化物酶检测趋化因子
第七章 细胞因子和T淋巴细胞
第一节 T细胞的分离和纯化
一、 用淋巴细胞分离液分离单个核细胞
二、 从单个核细胞中分离T细胞
三、 T细胞亚群的分离
第二节 建立抗原特异性T细胞株或T细胞克隆
第二章 细胞因子的免疫测定法
一、 建立T细胞株
二、 用有限稀释法建立T细胞克隆
第三节 T细胞产生细胞因子的研究
一、 T细胞亚群及其产生的细胞因子
二、 研究T细胞产生的细胞因子的方法
第四节 细胞因子对T细胞的作用
一、 调节T细胞生长
二、 调节T细胞分化和活性
三、 T细胞与免疫耐受
第八章 细胞因子和B淋巴细胞
第一节 应用免疫检测法的注意事项
第一节 研究B细胞反应的常用试剂
第二节 制备和纯化B细胞
一、 制备单个核细胞
二、 用尼龙毛法分离B细胞
三、 从单个核细胞中去除T细胞
四、 用粘附法分离单核细胞
五、 按细胞比重分离B细胞
六、 用单克隆抗体分离B细胞亚群
七、 用于检测BCGF和BCDF的人B细胞株
第三节 B细胞活化、增殖和分化试验
一、 免疫检测法与生物学活性检测法的比较
一、 B细胞活化试验
二、 细胞因子的BCGF活性检测
三、 细胞因子的BCDF活性检测
四、 细胞因子的T细胞取代因子（TRF）活性检测
第四节 固相酶免疫测定检测人B细胞分泌的免疫球蛋白
一、 测定人B细胞分泌的免疫球蛋白（Ig）
二、 测定IgG的亚类
三、 检测特异性抗体的酶免疫测定法
第九章 细胞因子和单核巨噬细胞
第一节 单核巨噬细胞的分离和纯化
二、 标准品的应用
一、 巨噬细胞的分离
二、 巨噬细胞的纯化
第二节 活化巨噬细胞的检测
一、 呼吸爆发活性的检测
二、 检测MHC-Ⅱ类分子表达
三、 检测甘露岩藻糖受体
四、 巨噬细胞吞噬功能的检测
五、 检测巨噬细胞分泌的细胞因子
六、 巨噬细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究
第三节 巨噬细胞移动抑制活性的测定
三、 影响检测结果的因素
一、 琼脂糖小滴培养法
二、 琼脂糖平皿打孔法
第十章 内皮细胞粘附实验和血小板活化因子
第一节 内皮细胞的研究方法
一、 内皮细胞的分离和培养
二、 内皮细胞趋化实验
三、 血管内皮细胞的前凝血活性
四、 内皮细胞粘附试验
第二节 PAF的测定
一、 从EC中提取PAF
四、 固相的包被和洗涤
二、 鉴定PAF
三、 定量检测PAF的生物活性
第十一章 细胞内和细胞膜上细胞因子的研究
第一节 检测单个细胞结合的细胞因子
一、 生物素-抗生物素蛋白技术
二、 碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶技术
三、 间接免疫荧光法
四、 酶联免疫过滤法（EIF）
第二节 检测单个细胞分泌的细胞因子
一、 反相溶血空斑试验
五、 细胞因子和抗细胞因子抗体的标记
二、 细胞斑点试验
三、 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
第三节 检测细胞内的细胞因子
一、 细胞培养和固定
二、 用荧光标记的单克隆抗体染色
第十二章 抗细胞因子抗体的制备和鉴定
第一节 选择免疫原
第二节 多肽和载体蛋白的连接
一、 同源双功能交联剂
二、 异源双功能交联剂
第二节 放射免疫测定
第三节 选择动物
第四节 佐剂
第五节 免疫程序
一、 免疫动物
二、 动物采血
第六节 单克隆抗体的制备
一、 与细胞融合有关的因素及溶液配制
二、 杂交瘤的制备方法
第七节 鉴定抗体和测定蛋白含量
一、 抗体的结合能力测定
一、 标记细胞因子的碘原法
二、 抗体的蛋白质含量测定
第八节 抗体的纯化
一、 IgG的纯化
二、 IgM的纯化
第十三章 细胞因子受体及其信号传导的研究
第一节 IFN-γ与受体结合的研究
一、 干扰素的磷酸化标记
二、 受体结合实验
三、 将[32P]Mu-IEN-γ共价交联到细胞上
四、 克隆化Mu-IFN-γ受体
第一章 概论
二、 放射免疫测定法（竞争抑制实验）
第二节 GM-CSF受体的研究
一、 用地高辛标记重组人GM-CSF
二、 受体结合试验
三、 受体-配体交联物的SDS-PAGE分析
第三节 用125I标记和IL-2研究IL-2受体
一、 用125I标记的重组IL-2分析IL-2受体
二、 IL-2受体分子量的测定
第四节 可溶性细胞因子受体的测定
一、 可溶性IL-2受体的测定
二、 检测可溶性IL-1受体
第三节 免疫放射测定法
第五节 细胞中受体信号传导的研究
一、 肌醇磷酸的测定
二、 G蛋白和信号传导
三、 磷脂的分析
四、 细胞内钙的测定
五、 测定cAMP
六、 转录调节因子的研究
第十四章 细胞因子的分子生物学研究
第一节 细胞因子基因的克隆和表达
一、 建立细胞因子cDNA文库
一、 抗细胞因子IgG的纯化
二、 建立细胞因子基因文库的原则
第二节 细胞因子基因的DNA印迹检测
一、 DNA分离、纯化和限制性酶消化
二、 凝胶电泳和Southern转移
三、 标记探针和Southern杂交
四、 影响结果的因素
第三节 细胞因子mRNA的RNA印迹实验
一、 提取和保存RNA时的注意事项
二、 总RNA的提取
三、 RNA的琼脂糖凝胶电泳
二、 放射标记IgG的氯胺T法
四、 Northern转移
五、 探针的制备和纯化
六、 DNA探针与膜上的RNA杂交（Northern杂交）
第四节 原位杂交
一、 组织或细胞样品的处理
二、 探针的选择和标记
三、 杂交和结果观察
四、 原位杂交研究细胞因子mRNA的实例
第五节 研究细胞因子mRNA的聚合酶链反应
一、 RNA纯化（微量法）
三、 免疫放射测定法
二、 逆转录
三、 PCR和结果分析
四、 定量PCR
第六节 细胞因子的基因研究和基因治疗
一、 转基因动物
二、 基因敲除动物
三、 细胞因子的基因治疗
第十五章 白细胞介素及其研究方法
第一节 白细胞介素1
一、 IL-1的结构特点
第四节 酶联免疫吸附试验
二、 IL-1的产生及其调节
三、 IL-1的受体
四、 IL-1的生物学功能
五、 IL-1的诱导和纯化方法
六、 IL-1的检测和研究方法
七、 IL-1的临床应用研究
第二节 白细胞介素2
一、 IL-2的结构和特点
二、 IL-2的产生和调节
三、 IL-2的受体
一、 双抗体夹心法
四、 IL-2的生物学活性
五、 IL-2的诱导和纯化方法
六、 IL-2的检测和研究方法
七、 IL-2的临床应用和研究
第三节 白细胞介素3
一、 IL-3的结构和特点
二、 IL-3的产生和调节
三、 IL-3的受体
四、 IL-3的生物学活性
五、 IL-3的诱导和纯化方法
二、 竞争抑制法
六、 IL-3的检测和研究方法
七、 IL-3的临床应用和研究
第四节 白细胞介素4
一、 IL-4的结构和特点
二、 IL-4的产生和调节
三、 IL-4的受体
四、 IL-4的生物学活性
五、 IL-4生物活性的检测
六、 IL-4的纯化
七、 IL-4的临床应用研究
三、 同源ELISA
第五节 白细胞介素5
一、 IL-5的结构和特点
二、 IL-5的产生和调节
三、 IL-5受体
四、 IL-5的生物学活性和应用研究
五、 IL-5的研究方法
第六节 白细胞介素6
一、 IL-6的结构和特点
二、 IL-6的产生和调节
三、 IL-6的受体
四、 标记抗体的方法
四、 IL-6的生物学活性和应用研究
五、 IL-6的研究方法
第七节 白细胞介素7
一、 IL-7的结构和特点
二、 IL-7的产生和调节
三、 IL-7受体
四、 IL-7的生物学活性和应用研究
五、 IL-7的研究方法
第八节 白细胞介素8和趋化因子家族
一、 白细胞介素8
第一节 细胞因子的概念
第五节 时间分辨荧光免疫检测法
二、 C-X-C趋化因子
三、 C-C趋化因子
四、 C趋化因子和C-X3-C趋化因子
五、 趋化因子受体
六、 趋化因子的生物学活性
七、 趋化因子的临床研究
八、 IL-8和趋化因子的研究方法
第九节 白细胞介素9
一、 IL-9的结构和特点
二、 IL-9的产生和调节
第六节 免疫沉淀法和Western印迹实验
三、 IL-9受体
四、 IL-9的生物学活性及其应用
五、 IL-9的研究方法
第十节 白细胞介素10
一、 IL-10的结构和特点
二、 IL-10的产生和调节
三、 IL-10受体
四、 IL-10的体外生物学功能
五、 IL-10的研究方法
六、 IL-10的体内研究和临床研究
一、 抗原制备
第十一节 白细胞介素11
一、 IL-11的结构和功能
二、 IL-11的产生和调节
三、 IL-11的受体
四、 IL-11的生物学活性和应用研究
五、 IL-11的研究方法
第十二节 白细胞介素12
一、 IL-12的结构和特点
二、 IL-12的产生和调节
三、 IL-12的受体
二、 免疫沉淀
四、 IL-12的生物学活性和动物体内研究
五、 IL-12的临床研究
六、 IL-12的研究方法
第十三节 其它白细胞介素
一、 白细胞介素13
二、 白细胞介素14
三、 白细胞介素15
四、 白细胞介素16
五、 白细胞介素17
六、 白细胞介素18
三、 SDS-PAGE电泳
第十六章 干扰素及其研究方法
第一节 α干扰素
一、 IFN-α的结构和特点
二、 IFN-α的产生和调节
三、 IFN-α的受体
四、 IFN-α的生物学活性
五、 IFN-α的诱导和纯化
六、 IFN-α的临床应用研究
第二节 β干扰素
一、 IFN-β的结构和特点
四、 Western印迹实验
二、 IFN-β的产生和调节
三、 IFN-β的受体
四、 IFN-β的生物学活性
五、 IFN-β的诱导和纯化
六、 IFN-β的临床应用研究
第三节 γ干扰素
一、 IFN-γ的结构和特点
二、 IFN-γ的产生和调节
三、 IFN-γ的受体
四、 IFN-γ的生物学活性
第三章 研究细胞因子调节细胞生长活性的方法
五、 IFN-γ的诱导和纯化
六、 IFN-γ的临床应用研究
第四节 干扰素的研究方法
一、 用基因工程技术检测干扰素的方法
二、 用细胞株检测干扰素活性
三、 检测IFN-γ诱导NO的活性
第十七章 肿瘤坏死因子家族及其研究方法
第一节 肿瘤坏死因子α
一、 TNF-α的结构和特点
二、 TNF-α的产生和调节
第一节 研究细胞因子调节细胞生长活性方法的要点
三、 TNF-α受体
四、 TNF-α的生物学活性
五、 TNF-α的诱导和纯化方法
六、 TNF-α和TNF-β活性的检测方法
七、 TNF-α的临床应用和研究
第二节 肿瘤坏死因子β和淋巴毒素
一、 TNF-β和LT-β的结构和特点
二、 TNF-β和LT-β的产生和调节
三、 TNF-β受体和LT-β受体
四、 TNF-β的生物学活性和临床应用研究
一、 用于检测细胞因子的细胞株
五、 TNF-β的研究方法
第三节 TNF超家族和TNFR超家族
一、 TNF超家族
二、 TNFR超家族
第十八章 集落刺激因子及其研究方法
第一节 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
一、 GM-CSF的结构和特点
二、 GM-CSF的产生和调节
三、 GM-CSF的受体
四、 GM-CSF的生物学活性
二、 测定细胞数的方法
五、 GM-CSF的诱导和纯化
六、 用细胞株检测造血生长因子活性
七、 GM-CSF的临床应用研究
第二节 粒细胞集落刺激因子
一、 G-CSF的结构和特点
二、 G-CSF的产生和调节
三、 G-CSF的受体
四、 G-CSF的生物学活性
五、 G-CSF的纯化
六、 G-CSF的临床应用研究
一、 细胞因子的共同特点
三、 细胞因子的标准品
第三节 巨噬细胞集落刺激因子
一、 M-CSF的结构和特点
二、 M-CSF的产生和调节
三、 M-CSF的受体
四、 M-CSF的生物学活性
五、 M-CSF的纯化和检测方法
六、 M-CSF的临床应用研究
第四节 红细胞生成素
一、 EPO的结构和特点
二、 EPO的产生和调节
四、 关于待测样品
三、 EPO的受体
四、 EPO的生物学活性
五、 EPO的检测和纯化方法
六、 EPO的临床应用和研究
第五节 干细胞因子
一、 SCF的结构和特点
二、 SCF的产生和调节
三、 SCF受体
四、 SCF的生物学活性
五、 SCF的检测和纯化
五、 待测细胞因子和细胞因子标准品的系列稀释
六、 SCF的临床应用研究
第六节 其它造血生长因子
一、 与血小板生成有关的造血生长因子
二、 与红细胞有关的造血生长因子
第十九章 促生长因子及其研究方法
第一节 表皮生长因子
一、 EGF的结构和特点
二、 EGF家族和EGF相关蛋白
三、 EGF的产生和调节
四、 EGF的受体
六、 结果的表达方式
五、 EGF的生物学活性
六、 EGF的纯化方法
七、 EGF的检测方法
八、 EGF的临床应用
第二节 转化生长因子α
一、 TGF-α的结构和特点
二、 TGF-α的产生和调节
三、 TGF-α的受体
四、 TGF-α的生物学活性和临床应用
五、 TGF-α的研究方法
第二节 细胞因子调节细胞生长活性的检测法
第三节 神经生长因子
一、 NGF的结构和特点
二、 NGF的产生和调节
三、 NGF的受体
四、 NGF的生物学活性
五、 NGF的纯化方法
六、 NGF的检测方法
七、 NGF的临床应用研究
八、 其它神经生长因子
第四节 血小板衍生的生长因子
一、 细胞株的培养、冻存和复苏
一、 PDGF的结构和特点
二、 PDGF的产生和调节
三、 PDGF的受体
四、 PDGF的生物学活性
五、 PDGF的纯化方法
六、 PDGF的检测方法
七、 PDGF的临床应用研究
第五节 成纤维细胞生长因子
一、 FGF的结构和特点
二、 FGF的产生和调节
二、 [3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数
三、 FGF的受体
四、 FGF的生物学活性
五、 FGF的纯化方法
六、 FGF的检测方法
七、 FGF的临床应用
第六节 血管内皮细胞生长因子
一、 VEGF的结构和特点
二、 VEGF的产生和调节
三、 VEGF的受体
四、 VEGF的生物学活性和应用研究
三、 MTT检测法
五、 VEGF的诱导和纯化方法
六、 VEGF的检测方法
第七节 肝细胞生长因子
第二十章 其它细胞因子及其研究方法
第一节 转化生长因子β
一、 TGF-β的结构和特点
二、 TGF-β的产生和调节
三、 TGF-β的受体
四、 TGF-β的生物学活性
五、 TGF-β的纯化方法
四、 XTT检测法
六、 TGF-β的检测和研究方法
七、 TGF-β受体的研究方法
八、 TGF-β的临床应用研究
第二节 白血病抑制因子
一、 LIF的结构和特点
二、 LIF的产生和调节
三、 LIF的受体
四、 LIF的生物学活性
五、 LIF的诱导和纯化方法
六、 LIF的检测方法
五、 MTS检测法
七、 LIF的临床应用研究
第三节 转移因子
一、 从胎盘提取TF
二、 从脾脏中提取TF
第四节 其它细胞因子
一、 巨噬细胞移动抑制因子
二、 巨噬细胞活化因子
三、 抑瘤素M
四、 双向调节素
主要参考文献
二、 细胞因子的分类
六、 NAG检测法
附录1 氨基酸的英文缩写
附录2 本文中常见的英文及缩写
附录3 常用试剂的配制
七、 Alamar BlueTM摄入法
八、 碱性磷酸酶检测法（AKP法）
九、 三磷酸腺苷检测法（ATP法）
十、 染料染色法测定细胞数
十一、 直接计数细胞
第三节 细胞因子活性单位的计算
一、 直接作图法
二、 概率单位分析法
第四节 研究细胞增殖的其它方法
三、 细胞因子的临床应用
一、 关于[3H]脱氧胸苷摄入法
二、 标记细胞核的放射自显影术
三、 用荧光细胞计数仪检测细胞数
四、 有丝分裂指数分析
第五节 集落形成实验
一、 分离骨髓细胞
二、 集落形成试验
第四章 细胞因子介导细胞毒活性的研究方法
第一节 细胞因子溶细胞和抑制细胞生长作用的检测法
第二节 细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法
第二节 细胞因子受体
一、 CMC中效应细胞的制备
二、 靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL）
三、 4小时51Cr释放法检测CMC活性
四、 [3H]脱氧胸苷释放法
五、 LDH释放法
六、 时间分辨荧光分析法
七、 用MTT检测法测定CMC
八、 荧光法检测CMC
九、 单个细胞的CMC试验
第三节 细胞凋亡的研究方法
一、 细胞膜受体
一、 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞
二、 用荧光激活的细胞分类仪检测凋亡细胞
第五章 细胞因子抗病毒活性的研究方法
第一节 测定细胞因子抑制细胞病变的活性
一、 微孔板检测法
二、 多孔检测法
第二节 病毒蚀斑形成实验
第三节 用抑制病毒产量法测定干扰素
一、 用病毒感染经干扰素处理的细胞
二、 病毒滴度的检测
二、 可溶性受体
三、 浓缩病毒保存液的制备
第六章 细胞因子趋化活性的研究方法
第一节 琼脂糖小滴化学动力学试验
一、 从外周血中分离多核粒细胞
二、 琼脂糖小滴化学动力学试验
第二节 琼脂糖中的趋化实验
一、 琼脂平皿的制备
二、 琼脂糖中的趋化实验
第三节 微孔小室中的趋化实验
一、 分离外周血单个核细胞