核酸研究技术.下册

目录
前言
第一部分 分子克隆
第一章 大肠杆菌的基本知识和技术
第一节 大肠杆菌的特征及其细胞结构
一 大肠杆菌的分类特征
二 大肠杆菌的细胞结构
第二节 大肠杆菌基因的命名规则
一 与代谢有关的结构基因
二 与代谢无直接关系的结构基因
三 与药物或噬菌体抗性有关的基因
四 抑制基因
五 染色体结构突变
六 其他
第三节 大肠杆菌的遗传性和变异性
一 大肠杆菌的变异性
二 大肠杆菌的菌株及其特性的鉴定
三 大肠杆菌菌株的保存方法
第四节 大肠杆菌的营养和生长
一 大肠杆菌的营养
二 大肠杆菌在固体培养基上的生长
三 大肠杆菌在液体培养基中的生长
第二章 基因工程的载体体系
第一节 质粒载体
一 细菌质粒的基本概念
二 基因工程中质粒载体的选择
三 介绍几类质粒载体
第二节 λ噬菌体载体
一 λ噬菌体的生物学特性
二 λ噬菌体载体的构建
三 常用的λ载体种类
四 λ载体的选择和应用
第三章 基因工程中常用的核酸酶类
第一节 DNA和RNA连接酶
一 T4 DNA连接酶
二 大肠杆菌DNA连接酶
三 T4 RNA连接酶
第二节 DNA聚合酶
一 大肠杆菌聚合酶Ⅰ
二 DNA聚合酶的Klenow片段
三 T4 DNA聚合酶
四 逆转录酶
五 末端转移酶
第三节 磷酸激酶和磷酸酶
一 T4多核苷酸激酶
二 碱性磷酸酶
第四节 核酸水解酶
一 外切酶Ⅲ
二 S1核酸酶
三 绿豆核酸内切酶
四 外切酶Ⅶ
五 λ外切酶
六 Bal 31核酸酶
七 核糖核酸酶H
第五节 甲基化酶
一 原核细胞中的甲基化酶
二 存在于大肠杆菌K12株中的甲基化酶
三 甲基化酶的用法
四 甲基化酶的实际应用
第四章 分子克隆技术（一）——基因与载体的剪切及重组
第一节 重组技术概述
一 剪切获取特定的基因片段
二 载体的选择
三 载体的剪切
四 基因与载体的重组
第二节 基因剪切常用方法
一 基因剪切的特点
二 应用限制性内切酶水解基因与载体形成粘末端
三 形成带有平末端的基因
四 从平末端改造成粘末端
第三节 剪切后基因与载体的连接
一 带有粘末端的DNA片段之间的连接
二 平末端及3'突出末端的连接特点
三 基因片段大小与连接的关系
四 防止载体自身连接的脱末端磷酸基团
五 连接后限制性内切酶识别位点的恢复
六 同聚物加尾后的连接
第五章 分子克隆技术（二）——重组DNA的转化、筛选和鉴定
第一节 重组DNA对大肠杆菌的转化
一 氯化钙法
二 氯化钙—氯化铷法
三 大肠杆菌X1776的转化
四 重组DNA克隆的初步筛选
第二节 重组DNA克隆的核酸杂交筛选方法
一 菌落杂交
二 重组噬菌体DNA的杂交筛选
第三节 免疫化学筛选方法
一 抗体的制备
二 抗体的纯化
三 抗体蛋白质的125I标记
四 溴化氰活化滤纸法
五 固相筛选法
第四节 重组质粒和λ噬菌体DNA的小量快速制备方法
一 碱裂解法制备质粒DNA
二 煮沸法制备质粒DNA
三 从单菌落中制备质粒DNA
四 平板裂解法制备λ噬菌体DNA
五 液体培养基裂解法制备λ噬菌体DNA
第五节 重组DNA的酶切分析和鉴定
一 单酶解分析
二 双酶解分析
三 多次酶解和电泳分析
四 部分降解酶切分析
五 人工合成探针在鉴定中的应用
第六节 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western技术在克隆鉴定中的应用
一 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
二 电泳转移
三 抗体的放射性检测法
第六章 基因文库
第一节 引言
一 基因的分离
二 什么是基因文库
三 基因文库构建的基本步骤
第二节 供体DNA
一 染色体DNA的抽提
二 染色体DNA的切割
第三节 载体DNA
一 λ替代型载体的结构特点
二 载体DNA的制备
三 制备载体的两臂和去除中央片段
第四节 重组连接、体外包装和感染方法
一 重组连接
二 重组噬菌体DNA的体外包装
三 重组噬菌体的感染
四 基因文库的构建规模
五 基因文库的扩增和贮存
第五节 考斯质粒为载体的基因文库
一 考斯质粒作载体的优缺点
二 基因文库的构建过程
结语
第七章 cDNA克隆
第一节 cDNA克隆的一般方法和步骤
一 cDNA克隆方法
二 cDNA克隆的具体步骤
第二节 特异cDNA的克隆
一 插入到表达载体中的cDNA克隆的筛选
二 选择杂交法筛选特异cDNA克隆
三 cDNA克隆操作实例
第三节 cDNA克隆应注意的问题
一 cDNA克隆所使用的酶制剂
二 作为cDNA合成模板的mRNA
三 载体DNA
四 器械的消毒处理
第二部分 基因表达
第八章 基因表达与几种表达体系
第一节 基因表达的基本原理
一 乳糖和色氨酸操纵子的特点及其转录翻译元件
二 lac与trp操纵子的基因表达调节
三 真核细胞中的基因表达与多级调控
第二节 常用的基因表达质粒
一 lac启动子的应用
二 trp启动子与人工合成tac启动子的应用
三 λ噬菌体中PL与PR两个启动子的应用
第三节 翻译框架与融合蛋白
一 基因表达与翻译框架
二 融合蛋白
第四节 几种基因表达体系的比较
第九章 大肠杆菌体系中的基因表达
第一节 真核基因与原核基因在结构和表达调控上的差异
第二节 影响真核基因在大肠杆菌体系中表达的因素
一 启动子
二 基因剂量
三 核糖体结合位点
四 基因产物的稳定性
五 编码多肽密码子的组成情况
六 表达产物的构象
七 表达产物的分子量大小
八 原核增强序列
第三节 真核基因在大肠杆菌中表达的方式
一 融合基因—融合蛋白
二 非融合基因—非融合蛋白
三 融合基因—非融合蛋白
第四节 真核基因在大肠杆菌体系中的表达设计
一 lac启动子
二 trp启动子
三 tac启动子
四 PL启动子
五 β内酰胺酶启动子
六 lpp启动子
第十章 酵母体系中的基因表达
第一节 酵母表达系统概述
一 载体
二 启动子及其他控制序列
三 寄主酵母菌株
第二节 酵母表达系统的构建
一 酵母启动子的提取
二 表达载体的构建
三 外源基因的引入和表达质粒的构建
第三节 酵母体系中的基因表达
一 酵母菌的转化
二 酵母质粒的检测
第十一章 哺乳动物细胞受体系统中的基因表达
第一节 哺乳动物细胞表达外源基因概述
第二节 哺乳动物细胞表达外源基因的必需条件
一 外源DNA或供体DNA
二 载体
三 重组质粒的改建
四 受体细胞
五 选择标记和选择培养基
六 重组DNA转染细胞
七 图示几种转化表达HBsAg的系统
附录一 大肠杆菌的常用培养基
附录二 大肠杆菌的常用菌株
附录三 大肠杆菌遗传学中常见的基因型
附图