Developmental Biology, Methods and Protocols for Mouse Embryo

目录
第一篇 发育生物学与小鼠的发育
第一章 发育生物学研究与发育的基本规律
第一节 小鼠发育生物学研究的意义
第二节 小鼠发育遗传学的研究历史
一、 小鼠遗传学研究的初始阶段
二、 小鼠发育遗传学的根源
第三节 实验性小鼠胚胎学的研究
一、 实验性小鼠胚胎学的起源
二、 小鼠发育的基因调控研究历史
三、 小鼠新基因及发育性变异的系统性研究
第四节 发育生物学的基本问题与概念
一、 发育生物学需解决的问题
二、 发育生物学的基本概念
第五节 小鼠胚胎发育的基本过程
一、 早期发育的基本过程
二、 小鼠胚胎发育的基本过程
第六节 胚胎期发育的基本规律
一、 卵细胞具有极性
二、 生物发育始于受精
三、 卵裂是一系列迅速的细胞分裂
四、 原肠期与胚层形成
五、 组织细胞分化和器官形成
第二章 小鼠的早期胚胎发育情况
第一节 生殖细胞的起源、移动及性别确定
一、 生殖细胞的起源以及向生殖嵴的移动
二、 性别确定与生殖细胞
第二节 精子、卵子的发生
一、 精子生成
二、 卵子发生
三、 卵子和精子发生的比较
第三节 排卵、受精和卵细胞骨架的组建
一、 排卵
二、 受精
三、 受精前后卵细胞的细胞骨架组建
第四节 早期卵裂与胚泡形成
一、 卵裂胚胎的特征
二、 早期卵裂中的蛋白表达
三、 细胞的聚集和极化
四、 细胞聚集与粘连中的变化
五、 胚胎核发育潜能的限制
第五节 植入与胚层的形成和分化
一、 植入
二、 原肠胚形成开始与滋养外胚层的衍化
三、 原始外胚层的形成
四、 原肠胚形成以及中胚层和内胚层的形成
五、 结节的形成
六、 中胚层组织多样化的产生
第六节 胚外组织的形成
一、 胚外内胚层
二、 内脏内胚层中的基因表达
三、 壁内胚层中的基因表达
四、 胚外中胚层的分化
五、 胎盘的结构和功能
第七节 发育中的印刻作用
一、 印刻作用
二、 X-灭活
三、 单性生殖
第三章 模式系统及躯体计划模式
第一节 模式系统与模式生物
一、 模式系统
二、 模式生物：脊椎动物
三、 小鼠是研究人类发育的模式生物
第二节 躯体计划模式与体节的作用
一、 脊椎动物体轴和胚层
二、 原肠胚期躯体的计划模式
三、 体节形成和模式化
第三节 早期胚胎细胞命运决定的模式机制
一、 小鼠早期胚胎细胞的命运
二、 来自植物区域的信号诱导中胚层
三、 诱导中胚层的信号
四、 中胚层特异基因表达的时间和调控
第四节 前内脏内胚层及其对胚胎模式的影响
一、 前内脏内胚层的模式及细胞运动
二、 脊椎动物前部发育的基本要素
三、 前内脏内胚层影响胚胎前部模式
第五节 原条和组织区的作用与神经诱导
一、 原条与组织区
二、 组织区的作用
三、 组织区与神经诱导
第六节 哺乳动物的体轴发育
一、 脊椎动物体轴的特化
二、 脊椎动物体轴的早期确定
三、 影响小鼠胚胎体轴模式的因素
第七节 体轴发育的早期不对称性
一、 左右轴的形成与不对称性
二、 内部器官的左右特异性
三、 脊椎动物的器官左右位置是由遗传控制的
四、 左右模式的演化
五、 Nodal与Lefties的不对称表达
第四章 细胞分化、形态发生与器宫形成
第一节 细胞分化
一、 细胞分化与发育
二、 基因表达模式的可逆性和遗传性
三、 细胞分化中特定基因的表达及调控
四、 细胞分化与程序性细胞死亡
第二节 细胞分化模型
一、 肌细胞分化模型
二、 血细胞分化模型
第三节 胚胎的早期形态发生
一、 形态发生的内容
二、 细胞的社会性
三、 细胞识别
四、 细胞粘附
五、 细胞连接
六、 细胞迁移
七、 细胞与细胞外基质的相互作用
八、 芽的形态发生模式
第四节 器官发生
一、 尾芽与体节及其衍生物
二、 肢体发育是典型的器官发育模式
三、 肾发生中的诱导模式
四、 肠的发生
五、 芽的形态发生与肺的发育
第五章 胚胎生长发育调控和胚胎后发育
第一节 细胞增殖与生长发育
一、 生长的形式
二、 细胞增殖、细胞周期调控与生长发育
第二节 程序性细胞死亡及其在发育中的作用
一、 胚胎发育中PCD的作用
二、 PCD的调控及细胞因子的影响
三、 小鼠的凋亡相关基因敲除实验
四、 PCD进化和起源
第三节 机体发育大小的调控
一、 机体发育大小受到综合因素的控制
二、 细胞生长控制发育大小
三、 细胞增殖的停止控制机体发育大小
四、 细胞死亡控制机体发育的大小
五、 细胞数量的调整与总细胞质量的正常
第四节 发育器官有其内在的生长程序
一、 发生在生长板上的长骨的生长
二、 脊椎动物横纹肌的生长依靠拉力
三、 成年哺乳动物皮肤和肠上皮不断被干细胞的增殖所代替
第五节 生长、衰老和生物进化
一、 衰老的机制
二、 衰老与遗传
三、 生物发育与进化
第六章 神经系统的发育
第一节 神经系统的发生
一、 神经系统的基本形成过程
二、 脊椎动物神经系统由神经板衍化而来
三、 早期脑和神经管区域性差异的产生
第二节 神经系统中细胞特异性的形成
一、 旁侧抑制限定神经前体细胞的发生
二、 脊髓分化依赖于背腹侧信号
三、 神经元来自细胞的非对称分裂
第三节 神经系统发生中的细胞骨架
一、 神经元细胞骨架的组成成分
二、 神经细胞骨架的发生过程
第四节 神经系统形成中的基因调控
一、 神经管背腹化模式的调控
二、 神经营养因子及信号转导
第五节 突触的形成和伸长
一、 神经肌接头的突触形成期
二、 神经肌接头之间的细胞联系
三、 生长锥
四、 轴突的诱导及生长锥引导分子
第六节 Schwann细胞及其前体细胞在神经发育中的调控作用
一、 Schwann细胞的发育
二、 Schwann细胞及其前体对神经发育的调节
三、 Schwann细胞对内身存活的调节
第七章 四肢、骨骼、朋肉与血管的发育
第一节 脊椎动物四肢发育
一、 脊椎动物的四肢由肢芽发育形成
二、 四肢的发生与位置信息相关
三、 肢体在三个轴向的发育模式
四、 同源盒基因与肢体发生模式相关并决定肢体的位置
五、 肢体的肌肉、软骨、肌腱的发育
第二节 骨组织的发育
一、 骨的发生与模式形成
二、 凝集区与骨骼发育
三、 BMPs对骨骼发育的调控
四、 基质金属蛋白酶在骨发生中的作用
五、 骨形成的方式
六、 骨组织中细胞的起源与分化
七、 骨基质的矿化
第三节 肌肉的发育
一、 MyoD家族的肌特异性转录因子
二、 碱性螺旋基因家族的转录因子
三、 生长因子在肌发生过程中的调控作用
四、 肌肉的发生
第四节 血管的发生
一、 血管的发生和毛细血管的形成
二、 大血管的形成
三、 血管平滑肌的分化和表型变化
四、 胚胎循环
第八章 颅颌面部与口腔的发育
第一节 头颅面部的发育
一、 鳃弓和咽区的形成
二、 面部发育过程
第二节 神经嵴细胞与外胚间充质细胞的发育
一、 神经嵴细胞的形成、迁移和分化
二、 神经嵴细胞分化迁移的影响因素
三、 颅神经嵴与口腔颌面部的发育
四、 信号分子对颅神经嵴来源的外胚间充质的基因凋控
第三节 腭的发育及腭裂的形成机制
一、 腭的发育
二、 腭裂形成
三、 生长因子、致畸原受体与腭裂形成的关系
第四节 早期牙胚发生
一、 牙胚发育的起始和特化
二、 早期牙胚发育中的上皮-间充质的信号传递途径
三、 影响牙齿发育的因素
四、 牙齿发育中的细胞凋亡
五、 牙齿发育中的神经生长因子和神经支配
第九章 干细胞
第一节 关于干细胞与胚胎干细胞
一、 干细胞研究历史及现状
二、 胚胎干细胞与多能干细胞的来源
三、 成体干细胞和肿瘤干细胞
四、 干细胞的生物学行为
五、 干细胞的诱导分化
六、 小鼠胚胎干细胞的研究意义
第二节 几种重要的干细胞
一、 神经干细胞和神经嵴干细胞
二、 骨骼肌下细胞
三、 肝脏干细胞
四、 造血干细胞
五、 骨髓基质干细胞和间充质干细胞
六、 胰腺干细胞
七、 角膜干细胞
第二篇 小鼠胚胎实验方法
第一章 实验用小鼠的起源和生物学特性
第一节 实验小鼠的起源
一、 实验小鼠的起源
二、 小鼠在发育生物学研究中的价值
三、 近交系的起源及小鼠遗传学特征
四、 常用近交系小鼠品系特征
五、 用于遗传性疾病研究的小鼠动物模型
第二节 鼠皮毛颜色、色素突变与遗传学
一、 鼠皮毛的颜色和遗传学
二、 ABCD色小鼠
三、 点突变小鼠
四、 其它突变小鼠
第三节 小鼠的生物学特征和主要品系
一、 小鼠解剖生理学特点
二、 生物学行为特点
三、 小鼠的主要品种和品系
第四节 小鼠的生殖特性
一、 小鼠生殖系统解剖学特点
二、 小鼠排卵和性周期特点
二、 受精与繁殖
第五节 小鼠的饲养与常规实验操作
一、 饲养和管理
二、 体温与水的调节
三、 血液的采集和静脉注射
四、 麻醉和镇痛
第六节 影响小鼠动物试验的因素
一、 环境因素
二、 饮水与食物
三、 应激
四、 动物行为
五、 小鼠的非传染性疾病
第七节 小鼠胚胎实验中的有关概念
第二章 小鼠的体外受精及胚胎移植的实验操作
第一节 小鼠精、卵细胞获取及体外受精
一、 建立小鼠正常交配、诱导超排卵
二、 卵母细胞与精子的体外分离及体外受精
三、 单性生殖卵母细胞的活化
四、 小鼠卵母细胞显微受精方法
第二节 假孕雌鼠的胚胎移植
一、 胚胎的输卵管移植
二、 胚胎的子宫转移
三、 刮宫产及小鼠的哺育
第三章 基因转移技术、转基因小鼠与基因敲除
第一节 基因转移方法与转基因动物
一、 转基因技术的发展
二、 基因转移方法
第二节 转基因小鼠的应用
一、 转基因小鼠作为人类疾病的动物模型
二、 转基因小鼠作为基因治疗的模型
三、 转基因小鼠用于免疫学研究
四、 转基因小鼠用于肿瘤学研究
五、 转基因小鼠在发育遗传学上的应用
六、 利用启动子指导的基因表达消除特异的细胞谱系
第三节 DNA重组基因转移技术
一、 转移基因的设计
二、 DNA显微注射系统
三、 原核的DNA显微注射
第四节 转基因和突变鼠系的建立
一、 建立提供DNA注射所用受精卵的雌鼠系
二、 建立提供胚胎干细胞注入囊胚的雌鼠系
三、 转基因实验中的各种鼠系
第五节 基因敲除小鼠
一、 慨述
二、 基因敲除小鼠的制备
三、 直接型与诱导型基因敲除
四、 基因敲除的主要应用领域
五、 问题和展望
第四章 嵌合体小鼠与核转移技术
第一节 嵌合体小鼠的产生
一、 分离卵裂期胚胎细胞、产生聚合嵌合体
二、 用于囊胚注射的显微注射系统
三、 囊胚选择性显微注射以产生嵌合体
四、 逆转录病毒感染胚胎及子宫内注射
五、 小鼠两细胞胚胎的电融合
六、 嵌合度检测
第二节 小鼠胚胎的核移植
一、 胚胎分离
二、 制作固定吸管和注射吸管
三、 去除卵细胞核
四、 细胞核注入无核单细胞
五、 灭活仙台病毒的制作
第五章 转基因鼠的分析
第一节 转基因鼠中外源基因的分析
第二节 目标DNA的提取
一、 从鼠尾中提取高分子量的DNA
二、 从9．5天P.C的卵黄囊或晚期胚胎中提取高分子量DNA
第三节 鼠胚胎少量小片段DNA的PCR检测
一、 检测植入后鼠胚的少量小基因片段
二、 胚胎组织或卵黄囊匀浆的PCR分析
第四节 确立纯合子转基因鼠或胚胎
一、 转移基因的定量
二、 转基因产物或表型的定量
三、 分裂间期核的原位杂交
四、 繁殖测试
五、 用一个侧翼探针进行Southern blot分析
六、 用侧翼引物做PCR分析
第五节 克隆转基因与宿主DNA接合部
一、 用转基因筛选λ噬菌体文库
二、 质粒回收和反向PCR
第六节 鼠细胞的核型分析及染色体整合基因定位
一、 鼠细胞的核型分析及显带
二、 原位杂交定位染色体的整合基因
第七节 转基因鼠的报告基因检测
一、 选择适用于谱系分析的转基因动物
二、 三种不同的转基因表达模式
三、 β·半乳糖苷酶(LacZ)活性染色
四、 检测带有多种珠蛋白基因的转基因细胞的DNA-DNA原位杂交技术
第六章 报告基因与细胞标记在细胞谱系研究中的应用
第一节 报告基因在研究转基因鼠胚胎的转录规律中的应用
一、 报告基因的设计
二、 功能检验
三、 分离与纯化注射用DNA片段
四、 报告基因活性的整胚染色
五、 转染基因的PCR鉴定
六、 报告基因的表达分析
七、 注意事项
第二节 植入后鼠胚胎中的细胞嫁接与标记
一、 细胞标记和植入确定细胞谱系与命运图谱
二、 培养6．5~8．5天P．C的胚胎
三、 用于植入的组织块的分离
四、 对6．5天胚胎的细胞植人与标记
五、 标记与植人
六、 被标记胚胎的分析
七、 注意事项
第七章 吝阶段胚胎的体外分离、培养
第一节 胚胎体外培养系统
一、 体外培养系统
二、 培养中的注意事项
第二节 获取植入前胚胎或囊胚
一、 收集及转移胚胎用吸管的制作
二、 着床前胚胎或囊胚的获取
三、 植入前各阶段胚胎所需培养液的准备
第三节 植入后各阶段胚胎的分离、培养
一、 植入后各阶段胚胎的分离
二、 植入后胚胎和组织的培养
第四节 植入后各阶段胚层及生殖细胞的分离及培养
一、 植入后各阶段胚层及生殖细胞的分离
二、 从不同阶段胚胎获得的原始胚芽细胞的培养
三、 畸胎瘤细胞的培养
第五节 肾被膜下组织移植及卵巢移植
一、 肾被膜下组织的植入
二、 卵巢的移植
第八章 小鼠胚胎干细胞的实验操作
第一节 胚胎干细胞的培养
一、 胚胎干细胞的体外培养
二、 滋养层细胞的制备
第二节 胚胎干细胞的获得与分离
一、 选择宿主鼠系，产生纯合子突变
二、 胚胎干细胞的分离
第三节 胚胎干细胞外源DNA导人及DNA检测
一、 设计靶载体，制备用于电穿孔的DNA
二、 电穿孔法将DNA导入ES细胞
三、 单个胚胎干细胞克隆的分离及DNA检测
第九章 干细胞生物工程与多能干细胞的分离和鉴定按术
第一节 干细胞生物工程
一、 干细胞生物工程
二、 干细胞研究听面临的问题
三、 干细胞治疗和免疫排斥
第二节 多种干细胞的体外培养和分离技术
一、 干细胞培养条件的确定
二、 从组织块中分离干细胞
第三节 单克隆细胞的培养和分离
一、 克隆化培养及其意义
二、 单层培养克隆法
三、 悬浮细胞的克隆
四、 用克隆环分离克隆
五、 悬浮克隆的分离
第四节 离心、磁珠、荧光激活等分离方法
一、 密度梯度离心分离法
二、 磁激活细胞分离法
三、 荧光激活细胞分离法
四、 其他基于抗体的分离方法
第五节 干细胞生物学性状的检测
一、 克隆形成能力和自我维持能力的体外检测
二、 增殖能力
三、 体外多向分化和横向分化功能的检测
四、 基于抗体的鉴定技术
五、 其他检测技术
第十章 小鼠基因组研究与单细胞RT-PCR cDN消减杂交
第一节 小鼠基因组研究
一、 基因组研究的意义
二、 基因组分子多态的生物学特征
三、 单核苷酸多态性(SNP)研究
四、 SNP分析的方法
第二节 单细胞BT-PCR cDNA消减杂交
一、 简介
二、 试剂材料准备
三、 实验方法步骤
第十一章 受精卵与胚胎的冻存处理与胚胎性别鉴定
第一节 哺乳动物胚胎的慢冻存
一、 哺乳动物胚胎的冻存的发展
二、 冷冻保护剂的选择和冻存方法
三、 冷冻保护剂冻存中的注意事项
第二节 哺乳动物胚胎的玻璃化冻存
一、 概述
二、 材料和方法
三、 注意事项
第三节 鼠胚胎性别鉴定
一、 利用逆转录病毒DNA分子探针确定性别
二、 通过羊膜细胞核的染色来区别胚胎的性别
第四节 小鼠组织外科分离
一、 部分肝脏切除
二、 脾切除
三、 肾切除
四、 尾静脉釆血
第五节 从鼠胚胎组织中分离总RNA
一、 材料试剂
二、 方法步骤
三、 注意事项
第十二章 小鼠胚胎标本的制作及基因、基因产物检测
第一节 小鼠胚胎标本的制作
一、 取材
二、 固定
三、 包埋与切片
四、 整胚包埋或整装标本
第二节 小鼠胚胎组织切片的免疫组化及原位杂交检测
一、 组织固定、包埋与切片
二、 胚胎切片的免疫组化染色
三、 利用RNA探针进行切片放射性原位杂交染色
四、 胚胎切片非放射性原位杂交
第三节 全胚标本的免疫组化染色与凋亡检测
一、 全胚标本的免疫组化染色
二、 程序性细胞死亡的全胚分析
第四节 整胚包埋小鼠胚胎标本原位杂交染色
一、 整胚包埋标本原位杂交
二、 双色原位杂交
三、 双色荧光素的原位杂交
四、 可选择的酶反应底物
五、 原位杂交后whole-mount胚胎组织的包埋及切片
六、 所需的主要试剂和溶液
第五节 厚浮片的全胚原位杂交
一、 石蜡切片的准备
二、 厚冷冻切片的准备
三、 浮片的杂交
四、 探针在浮片上的免疫定位
第六节 基因转录与基因表达产物同时定位的检测
一、 利用辣根过氧化物联结的二抗对组织的免疫定位
二、 过氧化物酶抗过氧化物酶法(PAP)
三、 抗生物素·生物素·过氧化物酶(ABC)染色
第十三韦 小鼠牙胚发育与腭裂动物模型的建立与分析
第一节 小鼠牙胚及相关细胞培养
一、 小鼠牙胚培养
二、 小鼠牙乳头细胞培养
第二节 小鼠牙胚cDNA文库的构建等
一、 小鼠牙胚cDNA文库的构建
二、 小鼠牙胚特异基因的筛选
三、 小鼠已知特异牙胚基因的克隆
第三节 腭裂小鼠动物模型
一、 常用的实验动物模型
二、 影响鰐裂发生率的因素
第四节 小鼠腭部发育与腭裂形成中差异cDNA文库的建立
一、 腭裂模型的建立
二、 小鼠腭突正常发育与腭裂形成中差异cDNA文库的建立
三、 文库的鉴定
四、 结果分析
第五节 消减杂交技术筛选腭裂形成相关基因
一、 消减杂交技术在发育畸形研究中的意义
二、 改良消减杂交方法
第十四章 小鼠神经嵴细胞、外胚间充质细胞及神经系统组织细胞的培养
第一节 神经嵴细胞的培养方法
一、 培养基
二、 神经嵴细胞分离培养方法
三、 神经嵴细胞的生长情况和鉴定
四、 神经嵴细胞取材过程中所需要注意的问题
第二节 外胚间充质细胞的培养
一、 材料和器械
二、 分离培养步骤
第三节 神经组织切片培养的解剖准备步骤及切片培养
一、 基本原则
二、 仪器和设备
三、 解剖和组织准备
四、 神经组织切片的培养
第四节 从外周神经培养基中纯化鼠施万细胞
一、 Schwann细胞裂解和培养
二、 用抗小鼠IgG包被塑料培养瓶
三、 成纤维细胞的免疫吸附
第五节 新生鼠星形胶质细胞和神经元的原代培养
第六节 新生鼠脑少突胶质前体细胞及少突胶质细胞的培养
第七节 成星形细胞的分离和星形细胞的原代培养
第十五苇 小鼠骨软骨组织来源细胞的培养
第一节 骨髓基质细胞与骨髓基质干细胞的培养
一、 骨髓基质干细胞概述
二、 骨髓基质细胞的培养
三、 骨髓基质干细胞体外分离和纯化
四、 骨髓基质干细胞的培养
五、 MSCs向骨组织的定向诱导分化
六、 骨髓基质干细胞在骨组织工程中的应用研究
第二节 骨、软骨细胞的培养
一、 软骨细胞的培养
二、 小鼠成骨细胞的培养
第三节 骨髓与外周血中树突状细胞的培养
一、 树突状细胞的起源和发育
二、 树突状细胞在免疫反应中的作用与地位
三、 以树突状细胞作为肿瘤疫苗研究的现状
四、 树突状细胞的分离、诱导与实验室培养
五、 分离诱导培养DC的方法
第十六章 组织重组与器官培养
第一节 器官培养在发育生物学的应用
一、 器官培养的条件
二、 部分器官的器官培养
三、 全胚胎的器官培养
四、 组织相互作用分析中的器官培养：牙胚模型
五、 器官培养的限制
第二节 胶原凝胶中组织的重建
一、 简介
二、 主要试剂材料
三、 组织分解与胶原制备
四、 将组织植入三维胶原凝胶
五、 检测分析
六、 注意事项
附录1 置主要参考文献
附录2 英汉词汇对照