现代实用细胞与分子生物学实验技术[电子资源.图书]

上篇 细胞学与组织学技术
第一章 细胞培养方法
第一节 细胞培养的基本操作和要求
一、细胞培养实验室的基本设备
二、细胞培养的准备
三、细胞的原代培养
四、细胞的传代培养
五、细胞的冻存和复苏
第二节 各种细胞的特殊培养方法
一、人皮肤成纤维细胞培养
二、人外周血淋巴细胞短期培养
三、琼脂培养法
四、血管平滑肌细胞培养
五、血管内皮细胞培养
六、大鼠腺垂体细胞的培养
第三节 器官培养方法
一、表玻皿器官培养法
二、不锈钢金属网格法
三、Wolff培养法
四、扩散盒培养法
第四节 神经细胞及组织培养
一、概述
二、神经组织培养与其他组织培养的差异
三、神经组织细胞培养的简要步骤
第五节 干细胞的分离培养与纯化
一、胚胎干细胞的分离培养与纯化
二、神经干细胞的分离培养与纯化
三、造血干细胞的分离培养与鉴定
第二章 染色体制作技术
第一节 染色体的制备
第二节 常用染色体显带技术
一、Q带
二、G带
三、C带
四、R带
五、高分辨显带技术
第三节 染色体的特殊染色
一、着丝点免疫组化染色
二、端粒酶染色
第二章 附录 染色体制作所需试剂的配制
第三章 组织制片技术与细胞化学技术
第一节 组织制片技术
一、取材与固定
二、石蜡包埋切片制作程序
三、常用染料和染色方法
四、树脂包埋光镜切片技术
五、恒冷箱切片机制片技术
六、整封制片技术
第二节 常用组织化学染色方法
一、糖原染色方法
二、核酸染色技术
三、酶组织化学染色方法
四、细胞凋亡检测技术
第三节 电镜细胞化学技术
一、基本原理
二、样品制备
三、常用的电镜酶细胞化学方法
第四章 免疫细胞化学技术
第一节 免疫细胞化学的免疫学及组织细胞学基础
一、抗原
二、抗体
三、补体系统
四、标记物
五、抗体的制备和配制
六、组织材料的处理(取材)
七、细胞和组织的固定
八、组织切片技术
九、免疫染色
十、对照设置
十一、免疫细胞化学结果的判断
第二节 免疫荧光细胞化学技术
一、免疫荧光细胞化学的原理
二、荧光抗体
三、荧光免疫细胞化学染色方法
第三节 酶免疫细胞化学技术
一、酶标抗体法
二、非标记抗体酶法
三、结果分析
四、免疫组织化学的几种特殊应用
第四节 亲和免疫细胞化学技术
一、生物素—抗生物素免疫细胞化学技术
二、葡萄球菌蛋白A
三、凝集素
第五节 免疫金银及铁标记技术
一、免疫金技术发展史
二、溶胶的基本概念
三、免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
四、光镜免疫金银细胞化学技术
第四章 附录 免疫细胞化学常用试剂介绍
第五章 原位杂交组织化学技术
第一节 原位杂交组织化学技术的基本原理和方法
一、基本原理
二、基本方法
第二节 核酸探针的种类、制备及标记
一、特异性目的核酸(或基因)的制备
二、目的核酸的扩增
三、核酸探针的放射性核素标记
四、核酸探针的非放射性标记
第三节 寡核苷酸探针的制备和标记
第四节 cRNA探针在原位杂交组织化学(ISHH)中的应用
一、核素标记cRNA探针在ISHH中的应用
二、生物素标记cRNA探针在ISHH中的应用
三、地高辛标记cRNA探针的应用
第五节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用
一、DNA探针的应用
二、寡核苷酸探针的应用
第六节 原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法
一、核素原位杂交组化与免疫组化PAP法的联合程序
二、非核素原位杂交组化与免疫组化联合法
第七节 原位杂交细胞化学技术的一些新进展
一、荧光原位杂交技术
二、肽—核酸原位杂交细胞化学技术
第五章 附录一 原位杂交组织化学常用试剂及处理
第五章 附录二 全血细胞培养染色体技术常用试剂配制
第六章 电子显微镜技术
第一节 透射电镜
一、透射电镜的基本原理
二、超薄切片技术
三、观察及记录
第二节 扫描电镜技术
一、扫描电镜概况
二、扫描电镜的生物样品制备
三、几种常用的样品制备方法
第三节 冷冻蚀刻电镜技术
一、物理固定
二、快速冷冻方法
三、冷冻复型样品制备
四、冷冻置换法
五、冷冻超薄切片法
第四节 免疫电镜技术
一、电镜免疫细胞化学技术概述
二、免疫铁蛋白技术
三、免疫酶细胞化学技术
四、免疫电镜胶体金标记法
第五节 电镜原位杂交技术
一、电镜原位杂交技术概述
二、几种电镜原位杂交技术操作程序
第七章 激光扫描共聚焦显微技术
第一节 基本原理
一、共聚焦方法的发展
二、激光扫描共聚焦显微镜
三、共聚焦显微镜图像模式
四、标本制备和图像采集
第二节 应用
一、细胞内pH的测量
二、膜电位测量
三、荧光漂白恢复技术
四、细胞断层扫描与三维重建
五、钙离子测定
第八章 细胞形态与细胞化学定量分析技术
第一节 基本概念
第二节 细胞数的体视学定量研究
一、从轮廓数估计细胞数
二、细胞的直接计数
三、随机抽样
第三节 细胞化学计量术
一、概论
二、细胞化学计量术的评定
第四节 显微光度测量术
一、显微光度测量术
二、显微吸收光度术
三、显微荧光光度术
第五节 显微分光光度计
一、测量方法
二、吸收光度测量
三、荧光光度测量
第六节 显微图像分析系统
一、组成
二、图像处理与分析原理
三、性能要求
四、图像分析系统性能的生物学方法评估
五、测量参数及其意义
第七节 流式细胞术
一、流式细胞仪的主要组件
二、流式细胞仪的原理
三、流式细胞仪的应用
四、流式细胞术的质量控制
第九章 膜片钳技术和细胞内注射技术
第一节 膜片钳技术
一、膜片钳技术的基本原理
二、实脸室的设立
三、膜片钳技术的方法学
四、实验资料的采样和分析处理
五、膜片钳技术的应用
第二节 细胞内注射技术
一、细胞内注射的类型
二、细胞内注射操作方法
第十章 转基因小鼠及小鼠基因剔除技术
第一节 实验小鼠的一般特性和饲养
一、实验小鼠的一般特性
二、小鼠的饲养与管理
三、基因剔除实验用的小鼠
第二节 基因剔除载体的设计与构建
一、基因剔除载体的基本要求
二、基因剔除载体的构建
三、基因组DNA文库的筛选和基因组DNA的结构分析
第三节 小鼠ES细胞的培养
一、小鼠胚胎纤维母细胞(MEF)的原代培养
二、小鼠胚胎纤维母细胞的丝裂霉素C处理
三、ES细胞的培养
第四节 在小鼠胚胎干细胞中进行基因剔除
一、ES细胞的转染和筛选
二、ES细胞基因组DNA的提取
三、Southern杂交
第五节 小鼠囊胚的显微注射
一、小鼠囊胚期胚胎的采集
二、囊胚的显微注射
三、胚胎的移植
第六节 基因剔除小鼠的分析
一、从小鼠尾巴提取基因组DNA
二、用Southern杂交进行小鼠的基因型分析
三、胚胎的whole mount原位杂交
下篇 分子生物学实验技术
第十一章 基因工程常用技术
第一节 核酸的分离
一、质粒DNA的制备
二、噬菌体DNA的制备
三、哺乳动物细胞高分子量DNA的制备
四、mRNA的制备
五、DNA、RNA的定量
第二节 核酸的电泳
一、核酸所带电荷
二、琼脂糖电泳
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳
四、分子量参照物
第十二章 基因的重组技术
第一节 工具酶
一、限制性内切酶
二、连接酶
三、DNA多聚酶
四、其他工具酶
第二节 载体
一、质粒载体
二、噬菌体载体
三、柯斯质粒载体
四、酵母载体
五、其他载体
第三节 DNA的重组
一、酶切反应条件
二、酶切片段的分离
三、连接反应
四、连接策略
第十三章 基因转移技术
第一节 原核细胞基因转移
一、细菌的转化
二、细菌的转导
第二节 真核细胞的基因转移
一、哺乳动物细胞基因转移
二、酵母菌的转化
第三节 克隆基因的表达
第十四章 基因分析技术
第一节 核酸分子杂交
一、探针的制备
二、探针的标记
三、DNA印迹杂交
第二节 核酸序列测定
一、基本原理
二、双脱氧测序的一般过程
第三节 聚合酶链反应
一、基本原理
二、基本操作过程
第四节 核酸多态性的检测
一、DNA多态性和遗传标记
二、遗传标记多态性和检测
三、点突变的检测
第五节 生物大分子的相互作用
一、酵母双杂交
二、免疫沉淀
三、亲和层析
四、肽库技术
第十五章 基因定位和克隆
第一节 连锁分析
一、连锁分析的基本原理
二、最大似然法与Lod值
三、相关软件与分析流程
第二节 体细胞杂交
一、体细胞杂交进行基因定位的基本原理
二、杂交细胞株的建立、筛选和鉴定
第三节 RH定位
一、RH定位的原理
二、操作步骤
三、RH定位的发展及应用
第四节 重叠群
一、构建重叠克隆群的策略
二、构建重叠克隆群的一般过程
三、构建重叠克隆群的困难及改进方法
四、重叠群应用
第五节 Alu-PCR
一、Alu-PCR技术的基本原理
二、Inter Alu-PCR的操作步骤
三、改进的Alu-PCR技术
四、Alu-PCR技术的应用
第六节 差异显示与抑制差减杂交
一、差异显示
二、抑制差减杂交
第十六章 未知基因的获得
第一节 人类基因组计划
一、人类基因组计划的产生
二、人类基因组计划的内容
三、人类基因组计划的开展与现状
四、我国的人类基因组计划及研究现状
五、人类基因组计划的延伸
六、人类基因组计划创造的机遇与挑战
第二节 基因组测序策略
一、基本概念
二、基本原理
三、历史与现状
四、实验材料与方法
第三节 cDNA测序策略
一、总RNA的提取及mRNA的制备
二、cDNA第一链和第二链的酶促合成和分级分离
三、构建重组λTrip IE×2噬菌体
四、构建Ptrip IE×2的质粒cDNA文库
五、Southern杂交
六、模板的制备
七、三种测序仪的工作原理比较
八、生物信息学分析
第十七章 基因治疗实验技术
第一节 基因治疗概述
一、基因治疗的概念
二、基因治疗的策略
三、适用于基因治疗的疾病
四、基因治疗的步骤
第二节 基因转移系统
一、非病毒基因转移方法
二、逆转录病毒载体系统
三、腺病毒载体系统
四、其他病毒载体转移系统
第三节 受体细胞转移基因的表达
一、基因转移和表达体外检测
二、基因转移的体内效应
三、转移基因表达调控
第四节 基因治疗的临床应用
一、遗传性疾病的基因治疗
二、肿瘤基因治疗
三、临床基因治疗的展望
第十八章 基因芯片技术
第一节 基因芯片设计
一、确定研究目标
二、样本选择和设计
三、探针的设计
四、控制系统的设计
第二节 基因芯片实验
一、目的基因制备
二、基片制备
三、芯片制备及点样后处理
四、样品制备
五、样本标记
六、杂交及洗涤
第三节 基因芯片的生物信息学分析
一、数据分析
二、基因表达数据库
三、分析方法
第十九章 核酸蛋白数据库和生物信息分析
第一节 生物信息学概论
一、生物信息学
二、生物信息学的研究内容
第二节 序列联配和数据库查询
一、序列联配
二、数据库相似性查询
第三节 生物信息学序列分析实例
一、序列分析网址
二、序列分析实例
第四节 国际互联网简介
一、互联网的基本知识介绍
二、网上生物学资源的利用