New gene-targeted strategy of molecular cloning:theory and methodology

副标题：无

作者：张学敏，王宜强主编

分类号：

ISBN：9787801211705

收录收藏 (0) 评论纠错

微信扫一扫,移动浏览光盘

简介

简介

本书介绍了有关寻找新基因的分子克隆主要策略和进展，包括理论和技术方法两部分，共七个章节：PCR程序与条件优化；PCR产物的克隆；突变、重组和体外选择；相邻未知DNA的克隆；文库构建与筛选；cDNA分析、克隆在差异和减法技术中的应用；基因家族成员的克隆。理论部分清晰明了，针对性较强，涉及分子克隆的主要方面，帮助读者掌握针对不同基因的分子克隆策略；技术方法部分的内容系统详实，易于操作。本书最大特点是除每章节专门的理论论述之外，在每一个具体方法或步骤中都有理论归纳和阐明了具体实验中可能遭遇的麻烦和因惑，对实验失败的原因给予了理论分析和对策指导。与国内一般的分子生物学实验指南的PCR有关书籍不同的是，本书是对PCR分子克隆策略的理论和方法的纵深论述，不但可以作为新手的入门向导，也可作为行家的工作手册，适用于从事生物、医学和其他与生命科学相关的基础和应用研究的科研或教学人员包括研究生（医、药、农、林、牧、理、工）。

第一章　PCR程序与条件优化
第1节　PCR的理论知识
第2节　用超长PCR法从基因组DNA中扩增长片段
第3节　用Tub DNA聚合酶自少量基因组DNA扩增5kb以下的DNA序列
第4节　触减PCR或步减PCR法：一步优化
第5节　RT—PCR一步法克隆cDNA大片段
第二章　PCR产物的克隆
第1节　利用T4 DNA聚合酶产生可直接克隆的PCR产物
第2节　不需连接酶的快速亚克隆法
第3节　利用突出的T/A克隆PCR产物
第4节　应用Xcm Ⅰ酶切位点制备T载体
第5节　应用T连接子策略修饰和定向克隆PCR产物
第三章　突变、重组和体外选择
第1节　重组PCR介导的基因重组及定点突变
第2节　DNA的体外重组与突变：用重叠区扩增法进行基因拼接
第3节　应用PCR插入子对合成基因进行框架内克隆
第4节　用巨型引物PCR方法进行基因突变和基因融合
第5节　单个反应管内完成快速、有效的基因突变
第6节　用耐热连接酶制造突变
第7节　用三步PCR介导接头分区诱变
第8节　Flip-PCR介导序列倒置
第9节　SELEX组合分析——寻找高亲和力核酸配体的方法
第四章　相邻未知DNA的克隆
第1节　快速扩增cDNA末端：RACE策略
第2节　单侧特异性PCR扩增基因调控区
第3节　用末端修饰法扩增cDNA相邻序列和基因组片段
第4节向第一链cDNA 3′端锚着固定序列：在克隆稀有全长mRNA中的应用
第5节　用欢乐PCR法在DNA克隆内快速定向移行
第6节　反式PCR：克隆cDNA末端的有效方法
第7节　用锚着PCR从基因组文库中快速扩增基因末端
第8节　用外显子扩增法从酵母人工染色体（YAC）中分离外显子序列
第五章　文库构建与筛选
第1节　用磁珠和PCR方法自小量RNA构建cDNA文库
第2节　通过对cDNA群体的顺次细分法提高低丰余度cDNA的平均丰余度
第3节　用少量细胞构建cDNA文库
第4节　应用非放射性方法对重组文库进行快速筛选
第5节　用PCR筛选cDNA文库
第6节　用亚文库法对稀有克隆进行富集和筛选
第六章　PCR在差异显示和减法技术中的应用
第1节　用分子选择法对cDNA序列丰度进行正常化
第2节　用磁珠和PCR进行减法cDNA克隆
第3节　扣除cDNA的PCR更新法
第4节　应用PCR进行cDNA文库的差式筛选
第5节　用DDRT-PCR鉴定和克隆差异表达的基因
第6节　基因组扣除方案
第7节　DNA/RNA指纹图：任意引物PCR法（AP-PCR）
第七章　基因家族成员的克隆
第1节　用简并寡核苷酸引物和PCR克隆基因家族成员
第2节　具最低序列相似性的基因扩增：次黄核苷酸在简并引物中的应用
第3节　如何设计用于扩增基因家族中特定成员或亚群的PCR引物
第4节　根据统计学资料设计引物
附录1　DNA片段末端内切酶切割效率
附录2　不同物种对密码子使用的偏向性比较
第一章　PCR程序与条件优化
第1节　PCR的理论知识
第2节　用超长PCR法从基因组DNA中扩增长片段
第3节　用Tub DNA聚合酶自少量基因组DNA扩增5kb以下的DNA序列
第4节　触减PCR或步减PCR法：一步优化
第5节　RT—PCR一步法克隆cDNA大片段
第二章　PCR产物的克隆
第1节　利用T4 DNA聚合酶产生可直接克隆的PCR产物
第2节　不需连接酶的快速亚克隆法
第3节　利用突出的T/A克隆PCR产物
第4节　应用Xcm Ⅰ酶切位点制备T载体
第5节　应用T连接子策略修饰和定向克隆PCR产物
第三章　突变、重组和体外选择
第1节　重组PCR介导的基因重组及定点突变
第2节　DNA的体外重组与突变：用重叠区扩增法进行基因拼接
第3节　应用PCR插入子对合成基因进行框架内克隆
第4节　用巨型引物PCR方法进行基因突变和基因融合
第5节　单个反应管内完成快速、有效的基因突变
第6节　用耐热连接酶制造突变
第7节　用三步PCR介导接头分区诱变
第8节　Flip-PCR介导序列倒置
第9节　SELEX组合分析——寻找高亲和力核酸配体的方法
第四章　相邻未知DNA的克隆
第1节　快速扩增cDNA末端：RACE策略
第2节　单侧特异性PCR扩增基因调控区
第3节　用末端修饰法扩增cDNA相邻序列和基因组片段
第4节向第一链cDNA 3′端锚着固定序列：在克隆稀有全长mRNA中的应用
第5节　用欢乐PCR法在DNA克隆内快速定向移行
第6节　反式PCR：克隆cDNA末端的有效方法
第7节　用锚着PCR从基因组文库中快速扩增基因末端
第8节　用外显子扩增法从酵母人工染色体（YAC）中分离外显子序列
第五章　文库构建与筛选
第1节　用磁珠和PCR方法自小量RNA构建cDNA文库
第2节　通过对cDNA群体的顺次细分法提高低丰余度cDNA的平均丰余度
第3节　用少量细胞构建cDNA文库
第4节　应用非放射性方法对重组文库进行快速筛选
第5节　用PCR筛选cDNA文库
第6节　用亚文库法对稀有克隆进行富集和筛选
第六章　PCR在差异显示和减法技术中的应用
第1节　用分子选择法对cDNA序列丰度进行正常化
第2节　用磁珠和PCR进行减法cDNA克隆
第3节　扣除cDNA的PCR更新法
第4节　应用PCR进行cDNA文库的差式筛选
第5节　用DDRT-PCR鉴定和克隆差异表达的基因
第6节　基因组扣除方案
第7节　DNA/RNA指纹图：任意引物PCR法（AP-PCR）
第七章　基因家族成员的克隆
第1节　用简并寡核苷酸引物和PCR克隆基因家族成员
第2节　具最低序列相似性的基因扩增：次黄核苷酸在简并引物中的应用
第3节　如何设计用于扩增基因家族中特定成员或亚群的PCR引物
第4节　根据统计学资料设计引物
附录1　DNA片段末端内切酶切割效率
附录2　不同物种对密码子使用的偏向性比较

已确认勘误

页码	勘误内容	提交人	修订印次

New gene-targeted strategy of molecular cloning:theory and methodology

名称
类型
大小

用户反馈

FAQ

New gene-targeted strategy of molecular cloning:theory and methodology

已确认勘误

第次印刷 筛选

第次印刷